Nueva estrategia para la construcción de una genoteca genómica de Pinus pinaster en cromosomas artificiales de bacterias

Resumen

Para poder conocer la estructura y organización de los genomas vegetales es necesario la clonación molecular de grandes fragmentos de secuencias genómicas para construir genotecas representativas. La construcción de genotecas genómicas en cromosomas artificiales de bacterias (BAC) es una de las herramientas más utilizadas con este fin y la estrategia elegida en este trabajo. Pero cuando se trabaja con especies que presentan genomas muy grandes, como el pino, realizar este tipo de genotecas es muy laborioso y costoso. En este estudio se describe un método para, a partir de cotiledones de P. pinaster, construir genotecas BAC en grupos de células, lo que disminuye drásticamente el coste, el espacio y el tiempo requerido. La genoteca BAC consta de 83 grupos de células con una media de 4000 clones por grupo y representa por ahora un 0,8 X del genoma de P. pinaster. También se demuestra que se puede realizar por PCR (reacción en cadena de la ADNpolimerasa) con rapidez la identificación del grupo que contiene un BAC de interés. Se ha identificado un grupo de células que contiene un clon BAC que porta una secuencia codificante similar a una quitinasa de clase I de Picea abies, y otro clon BAC en otro grupo que contiene secuencia homóloga a un ARNm desconocido de P.taeda. Esta estrategia permitirá rastrear y almacenar genotecas de organismos con grandes genomas y localizar en ella genes de interés con rapidez, describiéndose el método en detalle.